细胞培养是指在体外模拟体内环境(无菌、适宜温度、酸碱度和一定营养条件等),使之生存、生长、繁殖并维持主要结构和功能的一种方法。要达到细胞生长所需的条件,需要借助细胞耗材来实现。培养瓶适合长期培养、传代、作为种子细胞,瓶口较小,细胞不易被污染。广泛应用于细胞生物学、病毒学、微生物学和制药行业等领域。
细胞培养瓶的使用流程:
1、拧开盖子,用倾斜或者泵打的方式将培养基注入细胞工厂内,细胞悬液缓慢流入细胞工厂各层中。盖上盖子,静止。
2、缓慢将细胞工厂测立,有加液口的一侧背向自己,静置使细胞悬液缓慢均匀流入各层中。
3、侧向旋转九十度,保持进液口朝上,静置使细胞悬液缓慢均匀流入各层中。
4、双手握住进液口的一面,缓慢放平,避免液体大幅度晃动。
5、移致合适的培养箱中进行培养。
6、培养结束后,将培养基倒入收集容器。
细胞培养时生长减慢的原因和解决办法如下:
原因:更换了不同的培养液或血清;培养液中一些细胞生长必需成分如谷氨酰胺或生长因子等耗尽或缺乏或已被破坏;培养物中有少量细菌或真菌污染;试剂保存不当;比较新培养液与原培养液组分,比较新血清与旧血清支持细胞生长实验找到可能的原因。
解决办法:
增加起始培养细胞浓度;让细胞逐渐适应新培养液;换入新鲜配制培养液;补加谷氨酰胺或生长因子等;用无抗生素培养液培养,如发现污染,丢弃培养物,或用抗生素除菌;血清需保存在-5℃到-20℃;培养液需在2-8℃避光保存;含血清培养液在2-8℃保存,并在两周内用完;分离培养物,检测支原体。