生长因子又被称之为生长肽,是一类通过与特异的、高亲和的细胞膜受体结合,调节细胞生长与其他细胞功能等多效应的多肽类物质。生长因子子广泛存在予机体内各种组织,包括成熟组织和胚胎组织,并通过自分泌和或旁分泌方式进行调节,对机体的免疫、造血调控、创伤愈合、血管形成、细胞分化、细胞凋亡、形态发生、胚胎形成等方面产生着重要的调控作用。
在生长因子ELISA试剂盒的检测过程中,首先需要将标准品、待测样本和生物素化的检测抗体加入到酶标板孔中。这些物质会经过一段时间的孵育,使得样本中存在的VEGF与固相抗体和检测抗体发生结合反应。
在孵育过程结束后,需要通过洗涤的方式去除未结合的物质。这一步骤是为了确保后续的反应只发生在已经结合的VEGF上,从而提高检测的准确性。
接下来,将辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素加入到酶标板孔中。这种酶具有高度的亲和力,能够与生物素化的检测抗体结合。再次进行洗涤后,加入显色底物TMB。
TMB是一种无色的化合物,但在辣根过氧化物酶的催化下,它会转化为一种有色的产物。因此,当TMB加入到酶标板孔中后,需要在避光的条件下进行显色反应。这样可以避免光照对显色反应的影响,从而保证颜色反应的准确性。
最后,颜色反应的深浅与样本中VEGF的浓度成正比。也就是说,如果样本中的VEGF浓度较高,那么颜色反应就会更深;反之,如果VEGF浓度较低,颜色反应就会较浅。通过对比标准品的颜色反应,就可以准确地测定出样本中VEGF的浓度。
1.试剂盒应保存在2-8摄氏度的温度范围内。在使用前,需要将试剂盒从冰箱中取出,并在室温下平衡60分钟。如果浓缩洗涤液出现结晶现象,这是正常的,可以通过水浴加热使结晶溶解后再使用。同样地,样本也需要在室温下平衡60分钟才能使用。
2.预处理后的样本无需稀释,可以直接取10μL加样即可进行实验。
3.在进行温育操作时,必须严格按照说明书中标明的时间、加液量和顺序进行操作。这样可以确保实验结果的准确性和可靠性。
4.实验中未使用的板条应立即放回自封袋中,并密封保存在低温干燥的环境中。这样可以防止板条受到污染或损坏。
5.所有液体组分在使用前应充分摇匀。这样可以确保液体组分均匀分布,避免影响实验结果的准确性。