RAW 264.7 小鼠单核巨噬细胞白血病细胞说明书

  小鼠单核巨噬细胞白血病细胞

（RAW264.7）

细胞描述

此细胞株源自Abelson鼠科白血病病毒诱导的肿瘤。sIg-, Ia-抗原、Thy-1.2表面抗原阴性。此细胞株不分泌可检测到的病毒颗粒，XC斑点形成试验阴性。可以胞饮中性红并吞噬乳胶颗粒与酵母聚糖。可以抗体依赖性地分解绵羊红血球与肿瘤靶细胞。LPS或PPD处理2天可诱导分解红血球但对肿瘤靶细胞无作用。

细胞特性

1）  来源：鼠科白血病病毒诱导的肿瘤；单核细胞；巨噬细胞

2）  形态：不规则圆形，纺锤状，贴壁细胞，少量悬浮。

3）  含量：>1x106  细胞数

4）  规格：T25瓶或者1mL冻存管包装

5）  用途：仅供科研使用。

运输和保存：干冰运输及复苏好存活细胞：（1）1mL冻存管包装干冰运输，收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。（2）T25瓶复苏的存活细胞常温发货，收到后按照细胞接收后的处理方法操作。

细胞接收后的处理：

1）收到细胞后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。

2）请在4或5X显微镜下确认细胞状态，同时给刚收到的细胞拍照（10×，20×）各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为售后时收到时细胞状态的依据。

3）半贴细胞或贴壁不牢（悬浮）细胞：T25瓶置于37℃培养箱中约2-3h，显微镜下观察细胞的情况，若细胞密度在60%以下，客户需收集T25瓶中的悬浮细胞离心后用完培重悬后打回到原培养瓶中继续培养，若细胞生长70%-90%对细胞进行传代，传代时需要收集培养基中悬浮的细胞离心后回收。

4）备注：运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完培来培养细胞。  收到细胞后第一次传代建议T25培养瓶1：2传代 。 

细胞培养步骤

一．培养基及培养冻存条件准备：

1） 准备DMEM(包含2mM L-谷氨酰胺，0.11g / L丙酮酸钠)培养基；优质胎牛血清10 %；P/S青霉素-链霉素 1%。

2） 注意事项：

（a）在细胞生长的初始阶段，细胞以贴壁的形式生长并呈现出长方体的形态和有“伪足"延伸。随着培养时间的增加，细胞呈现圆形并以叠加的形式生长。细胞密度达到一定的程度，会有细胞以悬浮的方式散落到到培养基中，镜下观察会发现悬浮和贴壁的细胞会同时出现。（b）该细胞传代时不需要用胰酶消化。传代时，用无菌细胞刮刮拭培养表面将细胞刮落，收集离心后重悬接种到新的培养瓶中。（c）该细胞形态上包含松散贴壁的纺锤形和圆形或者立方形。当细胞密度较大时，细胞会轻微脱落变圆或者许多细胞堆积在一起，有些细胞甚至脱落漂浮。这些漂浮的细胞是存活的，在传代时应收集起来，离心后细胞沉淀可以继续培养。（d）血清质量差异可能引起细胞贴壁能力变化，应选用高质量的胎牛血清。

3） 培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%。

4） 冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。

二． 细胞处理：

1）冻存细胞的复苏：

将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含4-6mL完培的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，完培重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完培的培养瓶（或皿）中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。

2） 细胞传代：如果细胞密度达70%-90%，即可进行传代培养。

该细胞为悬浮和轻微的贴壁细胞，传代可以参考以下方法：

该细胞用细胞刮铲替代胰酶来对细胞进行处理。用无菌细胞刮铲刮拭细胞附着培养表面将细胞刮落，收集细胞后离心去上清，重悬后接种到新的装有新鲜培养液的培养瓶内。收货后第一次传代1:2进行，后续可以根据实际的情况以1:2~1:4的比例进行传代。

3） 细胞冻存: 收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。下面T25瓶为例；

1. 1，细胞用细胞刮铲替代胰酶来对细胞进行处理。用无菌细胞刮铲刮拭细胞附着培养表面将细胞刮落，收集细胞。

2. 1000rpm离心3-5min，去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞 ，按每1ml冻存液含1×106~1×107个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中，标注好名称、代数、日期等信息。

3. 将要冻存的细胞置于程序降温盒中，-80度冰箱中过夜，之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。

注意事项：

 1. 所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。

2. 建议在复苏冻存细胞时始终使用防护手套、衣服和戴上防护面罩。注意：冻存管浸没在液氮中会泄漏，并会慢慢充满液氮。解冻时，液氮转化成气相可能导致容器爆炸或用危险力吹掉其盖子，从而产生飞扬的碎屑造成人员伤害。