土壤铵态氮试剂盒说明书
微量法 100T/96S
注 意 :正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
测定意义:
土壤中的铵态氮可被土壤胶体吸附,呈交换性铵状态氮肥,也可溶解在土壤溶液中,能直接被植物吸收利用,属于速效性氮素。
测定原理:
土壤中的铵态氮在强碱性介质中与次氯酸盐和苯酚作用,生成水溶性染料靛酚蓝,在 625nm
处有特征吸收峰,吸光值与铵态氮含量成正比。
自备实验用品及仪器:
天平、常温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板、振荡仪。
试剂组成和配制:
提取液:液体 110mL×1 瓶,4℃保存。
试剂一:粉剂×2 瓶,4℃避光保存。临用前根据用量每瓶加 4mL 双蒸水溶解,现配现用。
试剂二:液体 8mL×1 瓶,4℃避光保存。
试剂三:液体 2mL×1 瓶,4℃保存。
样本处理:
按照土壤质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 新鲜土样,加入
1mL 提取液),振荡提取 1h,10000g ,25℃离心 10min,取上清液待测。
测定操作表:
1、 分光光度计/酶标仪预热 30min,调节波长至 625nm,蒸馏水调零。
2、 操作表
空白管 | 测定管 | |
样本(μL) | 20 | |
提取液(μL) | 20 | |
试剂一(μL) | 80 | 80 |
试剂二(μL) | 80 | 80 |
充分混匀,25℃静置 1h | ||
试剂三(μL) | 20 | 20 |
充分混匀,于微量石英比色皿/96 孔板中,蒸馏水调零,测定 625nm 处吸光值 A,分别 记为 A 空白管和 A 测定管,△A=A 测定管-A 空白管 |
计算公式
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准曲线:y =0.1522x-0.0009,R2= 0.9993
NH +—N 含量(mg/kg 鲜重)=(△A+0.0009)÷ 0.1522÷W
= 6.57×(△A+0.0009)÷W
W :样本质量,g
b.用 96 孔板测定的
计算公式如下 :
标准曲线:y = 0.0761x-0.0009,R2= 0.9993
NH +—N 含量(mg/kg 鲜重)=(△A+0.0009)÷ 0.0761÷W
= 13.14×(△A+0.0009)÷W
W:样本质量,g
注意事项 :
1 .试剂一必须避光低温保存,配制好的试剂一 4℃保存不能超过 20 天。
2. 浸提液最好在当日完成测定,如果不能完成,可冷冻保存,但不能超过两天。
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