土壤亮氨酸氨基肽酶（Solid-Leucine Aminopeptidase,S- LAP）试剂盒说明书

土壤亮氨酸氨基肽酶（Solid-Leucine Aminopeptidase,S- LAP）试剂盒说明书

                                  微量法100管/48样

注   意 ：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定

测定意义：                           

S-LAP是一类能水解肽链N-末端为亮氨酸的酶，由土壤微生物分泌。S-LAP活性变化与机体某些病理状态密切相关。

测定原理：

S-LAP分解L-亮氨酰对硝基苯胺生成对硝基苯胺，后者在405nm有最大吸收峰，通过测定吸光值升高速率来计算S-LAP活性。

自备用品：

酶标仪/可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、96孔板/微量石英比色皿和蒸馏水。

试剂的组成和配制：

试剂一：液体35mL×1瓶，4℃保存；

试剂二：粉剂×1瓶，-20℃保存；

S-LAP测定步骤：

1、   分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至405nm，蒸馏水调零。

2、   在试剂二瓶中加入15mL试剂一充分溶解（如较难溶解，可60℃水浴加热约30min促进溶解）；用不完的试剂分装后-20℃保存，禁止反复冻融。

3、   操作表

混匀， 37℃振荡反应1h后，8000g 4℃离心10min，S-LAP活力单位的计算：

取200μL上清液于微量石英比色皿或96孔板中，405nm处测定吸光值A，计算ΔA=A测定管-A对照管。每个测定管设一个对照管。

a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下：

单位的定义：每天每g土样每天生成1 μmol 对硝基苯胺定义为一个酶活力单位。

S-LAP（μmol/d /g 土样）＝ΔA×V反总÷（ε×d）×106÷W÷T=14.8×ΔA

V反总：反应体系总体积，3×10-4 L；ε：对硝基苯胺摩尔消光系数，9.72×103 L / mol /cm；d：比色皿光径，

1cm；T：反应时间，1h=1/24d； W：样本质量，0.05g。

b.用96孔板测定的计算公式如下：

单位的定义：每天每g土样每天生成1 μmol 对硝基苯胺定义为一个酶活力单位。

S-LAP（μmol/d /g 土样）＝ΔA×V反总÷（ε×d）×106÷W÷T=29.6×ΔA

V反总：反应体系总体积，3×10-4 L；ε：对硝基苯胺摩尔消光系数，9.72×103 L / mol /cm；d：比色皿光径，0.5cm；T：反应时间，1h=1/24d； W：样本质量，0.05g。