土壤有效硼试剂盒说明书
微量法100T/96S
注 意 :正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义:
土壤中有效硼直接影响着植物的吸收和利用。
测定原理:
硼与甲亚胺在弱酸条件下形成棕黄色配合物,在420nm有特征吸收峰。
自备实验用品及仪器:
天平、常温离心机、震荡仪、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板。
试剂组成和配制:
试剂一:液体5mL×1支,4℃保存。
试剂二:粉剂×1瓶,4℃保存。临用前加8mL蒸馏水溶解,加0.125mL乙酸。
试剂三:粉剂×1瓶,4℃避光保存。临用前加4mL蒸馏水溶解。
样本处理:
新鲜土样风干,过100目筛,按照土壤质量(g):蒸馏水体积(mL)为1:2的比例(建议称取约0.5g土样,加入1mL蒸馏水)加入蒸馏水,沸水中浸提10min,待自然冷却,加入50μL试剂一,震荡5min,8000g ,25℃离心10min,取上清液待测。
测定操作表:
空白管 | 测定管 | |
样本(μL) | 40 | |
试剂二(μL) | 80 | 80 |
试剂三(μL) | 40 | 40 |
H2O(μL) | 80 | 40 |
充分混匀,25℃黑暗中静置1h | ||
于微量石英比色皿/96孔板,蒸馏水调零,测定420nm处吸光值A,分别记为A空白管和A测定管,△A=A测定管-A空白管 |
计算公式:
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准曲线:y = 0.3897x - 0.021,R² = 0.9995
全硼含量(mg/kg)=(△A+0.021)÷ 0.3897÷(W÷V样总)
= 2.56×(△A+0.021)÷W
V样总:加入提取液体积,1mL,W:样本质量,g
b. 用96孔板测定的计算公式如下
标准曲线:y = 0.1949x - 0.021,R² = 0.9995
有效硼含量(mg/kg)=(△A+0.021)÷ 0.1949÷(W÷V样总)
=5.13×(△A+0.021)÷W
V样总:加入提取液体积,1mL,W:样本质量,g
注意事项:
1. 配制好的试剂二4℃保存不可超过7天。
2. 显色时严格控制温度并且避光,以免显色剂见光分解。
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