组织无机磷含量测定试剂盒说明书

组织无机磷含量测定试剂盒说明书

                                                微量法100T/96S

注    意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义：

无机磷主要指磷酸根，参与生物体内多种代谢，包括能量代谢、核酸代谢、蛋白质磷酸化和脱磷酸化等等，此外促进碳水化合物的合成、转化和转运。

测定原理：

钼蓝与磷酸根生成660nm有特征吸收峰的物质，通过测定660nm光吸收，即可计算无机磷含量。

自备仪器和用品：

离心机、水浴锅、可调式移液枪、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、和蒸馏水。

试剂组成和配置：

试剂一：液体100mL×1瓶，4℃保存。

试剂二：液体5mL×1瓶，4℃保存。

试剂三：粉剂×1瓶，4℃避光保存。临用前配制，加入10 mL蒸馏水，充分溶解后加入试剂二（全部），混匀。

标准品：液体×1支。

无机磷提取：

按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一）进行冰浴匀浆。10000rpm，4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

测定：

1. 分光光度计/酶标仪预热30 min，调节波长到660 nm，蒸馏水调零。

2.打开水浴锅，调节温度到40℃。

3. 空白管：取0.5mL EP管，依次加入100μL蒸馏水，100μL试剂三，混匀后置于40℃水浴保温10min，室温冷却10 min后于660 nm测定吸光度，记为A空白管。

4. 标准管：取0.5mL EP管，依次加入10μL标准液，90μL蒸馏水，100μL试剂三，混匀后置于40℃水浴保温10min，室温冷却10 min后于660 nm测定吸光度，记为A标准管。

5. 测定管：取0.5mL EP管，依次加入10μL上清液，90μL蒸馏水，100μL试剂三，混匀后置于40℃水浴保温10min，室温冷却10 min后于660 nm测定吸光度，记为A测定管。

注意：空白管和标准管只需测定一次。

组织无机磷含量计算：

（1）         按照蛋白含量计算

无机磷含量(μmol/mg prot)= [C标准液×(A测定管－A空白管)÷(A标准管－A空白管)]×V总÷Cpr

=1×(A测定管－A空白管)÷(A标准管－A空白管)÷Cpr

(2)  按照样本质量计算

无机磷含量(μmol/g 鲜重 )= [C标准液×(A测定管－A空白管)÷(A标准管－A空白管)]×V总÷W

=1×(A测定管－A空白管)÷(A标准管－A空白管)÷W

C标准液：1mmol/L；V总：上清液总体积，1mL=0.001 L；W：样品质量，g。

注意事项：

1.        试剂三需临用前配制，并且当天使用完毕。

2.        40min内完成比色。

3.        Z低检出限为10μmol/L。