植物总酚(Total Phenols,TP)试剂盒说明书
微量法100T/48S
注 意 :正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义:
植物酚类物质具有清除自由基,抗氧化抗衰老的作用,具有较高的营养价值和医疗保健作用而广泛应用于化妆品、食品、医药等领域。
测定原理:
在碱性条件下,酚类物质将钨钼酸还原,产生蓝色化合物,在760nm处有特征吸收峰,测760nm处的吸光值,即可得样品总酚含量。
自备实验用品及仪器:
天平、烘箱、粉碎仪、筛子、超声破碎仪、60%乙醇、离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、蒸馏水。
试剂组成和配制:
提取液:60%乙醇,自备。
试剂一:液体3mL×1瓶,4℃保存。
试剂二:液体5mL×1瓶,4℃保存。
总酚提取:
直接检测
测定操作表:
1、 分光光度计/酶标仪预热30min,调节波长至760nm,蒸馏水调零。
2、 操作表
对照管 | 测定管 | |
样本待测液(µL) | 10 | 10 |
试剂一(µL) | 50 | |
混匀,25℃静置2min | ||
试剂二(µL) | 50 | 50 |
H2O(µL) | 140 | 90 |
混匀,25℃静置10 min,于微量石英比色皿/96孔板中,测定760nm吸光值,ΔA=A测定-A对照。 |
总酚含量计算公式:
标准曲线:y = 2.808x+0.0012,R2 = 0.9994
总酚含量(mg/g 干重)=(ΔA-0.0012 )÷2.808
= 0.356×(ΔA–0.0012 )
注意事项:
1. 吸光值大于2,样品适当稀释再测定,注意计算公式里乘以稀释倍数。
2. 试剂一对皮肤有一定的刺激性,请操作时做好防护措施。
3. Z低检出限为2.4 μg/g。
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