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甲醛脱氢酶(FDH)试剂盒

简要描述:甲醛是一种能与蛋白质、核酸和脂类产生非特异性反应的活泼化合物,对所有生物都具有很高毒性。甲醛脱氢酶作为含锌中等链醇脱氢酶(ADH)的家庭成员之一,广泛存在于原核和真核生物中,该酶能利用NAD+作为辅酶,将有毒的甲醛氧化,是甲醛氧化途径中的关键酶。甲醛脱氢酶(FDH)试剂盒现货供应。

  • 更新时间:2024-06-29
  • 厂商性质:生产厂家
  • 生产地址:上海
  • 访  问  量:745

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详细介绍

品牌YLKBIOCAS详见说明书
分子式详见说明书纯度详见说明书
分子量详见说明书货号YLK-SH114
规格100管/96样、50管/48样供货周期现货
主要用途科研应用领域化工,生物产业
测定方法:微量法、紫外分光光度法

甲醛脱氢酶(FDH)试剂盒说明书

                                                      微量法100T/96S

 

    意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义:

甲醛是一种能与蛋白质、核酸和脂类产生非特异性反应的活泼化合物,对所有生物都具有很高毒性。甲醛脱氢酶作为含锌中等链醇脱氢酶(ADH)的家庭成员之一,广泛存在于原核和真核生物中,该酶能利用NAD+作为辅酶,将有毒的甲醛氧化,是甲醛氧化途径中的关键酶。

 

测定原理:

甲醛脱氢酶催化甲醛和NAD+产生NADH,在340nm处的吸光值会增加,测定340nm处的吸光值变化,可计算得到甲醛脱氢酶的活性。

 

自备实验用品及仪器:
天平、离心机、酶标仪、96孔板、蒸馏水。

 

试剂组成和配制:

提取液:液体100mL×1瓶,4℃保存。

试剂一:液体15mL×1瓶,4℃保存。

试剂二:粉剂×1瓶,-20℃保存;临用前加入6mL水溶解待用,用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融。

试剂三:粉剂×1支,4℃保存;临用前加入1.5mL水溶解待用。

试剂四:液体1.5mL×1支,4℃避光保存。

 

FDH提取:

1.        组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)15~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液)进行冰浴匀浆,然后10000g4℃,离心20min

2.        细胞:按照细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~10001的比例(建议500万细胞加入1mL提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后10000g4℃,离心10min,取上清置于冰上待测。

3.        液体:直接检测。

 

测定操作表:

1、   酶标仪预热30min,调节波长至340nm

2、   操作表

96孔板中加入如下试剂


测定管

样本(µL

20

试剂一(µL

110

试剂二(µL

50

试剂三(µL

10

试剂四(µL

10

混匀,于340nm下测定初始吸光值A15min后的吸光值A2△A=A2-A1

若样本数量较多,可将试剂按比例配成工作液使用。

 

FDH酶活计算:

1)按蛋白浓度计算

酶活定义:每毫克蛋白每分钟催化还原1nmol NAD+的酶量为1个酶活单位。

FDH酶活(nmol/min/mg prot= ×V反总÷V×Cpr÷T = 643×△A÷Cpr

2)按样本质量计算

酶活定义:每克样品每分钟催化还原1nmol NAD+的酶量为1个酶活单位。

FDH酶活(nmol/min/g 鲜重)= ×V反总÷V×W÷V样总)÷T =643×△A÷W

3)按照细胞数量计算

酶活定义:每104个细胞每分钟催化还原1nmol NAD+的酶量为1个酶活单位。

FDH酶活(nmol/min/104cell= ×V反总÷V÷V样总×细胞数量(万个))÷T= 643×△A÷细胞数量

4)按液体体积计算

酶活定义:每mL样本每分钟催化还原1nmol NAD+的酶量为1个酶活单位。

FDH酶活(nmol/min/mL= ×V反总÷V÷T=643×△A

NADH微摩尔消光系数,6.22×10-3 L/µmol/cmd96孔板光径,0.5cmV反总:反应体系总体积,0.2mLV样:反应体系中样本体积,0.02mLV样总:加入提取液体积,1mLT,反应时间,5minCpr:样本蛋白浓度,mg/mLW:样本质量,g


甲醛脱氢酶(FDH)试剂盒仅供科研!

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