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果胶酶(pectinase)试剂盒

简要描述:果胶酶(pectinase)是一类分解果胶质酶类的总称,包括原果胶酶,果胶酯酶,多聚半乳糖醛酸酶和果胶裂解酶四大类,广泛存在于植物果实和微生物中,主要用于食品、酿酒、环保、医药、纺织及日化用品行业。果胶酶(pectinase)试剂盒现货供应。

  • 更新时间:2024-06-29
  • 厂商性质:生产厂家
  • 生产地址:上海
  • 访  问  量:1025

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详细介绍

品牌YLKBIOCAS详见说明书
分子式详见说明书纯度详见说明书
分子量详见说明书货号YLK-SH104
规格100管/48样、50管/24样供货周期现货
主要用途科研应用领域化工,生物产业
测定方法:微量法、可见分光光度法

果胶酶(pectinase)试剂盒说明书

                                          微量法100T/48S

 

   :正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

测定意义:

果胶酶(pectinase)是一类分解果胶质酶类的总称,包括原果胶酶,果胶酯酶,多聚半乳糖醛酸酶和果胶裂解酶四大类,广泛存在于植物果实和微生物中,主要用于食品、酿酒、环保、医药、纺织及日化用品行业。

 

测定原理:

果胶酶水解果胶生成半乳糖醛酸,具有还原性醛基,与DNS试剂反应生成红棕色物质,在540nm有特征吸收峰,测定540nm处吸光值变化可计算得果胶酶活性。

 

自备实验用品及仪器:

天平、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、恒温水浴锅。

 

试剂组成和配制:

提取液:液体100mL×1瓶,4℃保存。

试剂一:液体20mL×1瓶,4℃保存。

试剂二:粉剂×2瓶,4℃保存;临用前加入7.5mL试剂一,50℃加热溶解,用不完的试剂4℃保存一周。

试剂三:液体20mL×1瓶,4℃避光保存。

 

酶液提取:

1.组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)15~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆。10000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。

2.细菌、真菌:按照细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~10001的比例(建议500万细胞加入1mL提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后10000g4离心10min,取上清置于冰上待测。

3. 细胞培养液等:直接检测。

 

测定操作表:


对照管

测定管

试剂二µL

120

120

50℃水浴温育5min

样本µL


30

煮沸样本µL

30


混匀,50℃水浴反应30min

试剂三µL

150

150

沸水浴5min,冰浴冷却终止反应,8000g4℃,离心10min,蒸馏水调零,取上清于微量石英比色皿或96孔板测定540nm处吸光值A,△A=A测定管-A对照管。每个测定管需设一个对照管。

 

 

酶活性计算公式:

a.        用微量石英比色皿测定的计算公式如下

标准曲线:y = 3.9642x - 0.008R2 = 0.9996x为标准品浓度,mg/mLy为吸光值。

1.按照蛋白浓度计算

酶活性定义:50℃pH3.5条件下,每毫克蛋白每小时分解果胶产生1mg半乳糖醛酸为一个酶活力单位。

果胶酶活性(mg/h/mg prot= (ΔA+0.008) ÷3.9642×V反总÷V×Cpr÷T

= 2.523×(ΔA+0.008)÷Cpr

2.按照样本质量计算

酶活性定义:50℃pH3.5条件下,每克样本每小时分解果胶产生1mg半乳糖醛酸为一个酶活力单位。

果胶酶活性(mg/h /g 鲜重)=(ΔA+0.008) ÷3.9642×V反总÷V×W÷V样总)÷T

= 2.523×(ΔA+0.008)÷W

3. 按细胞数量计算

酶活性定义:50℃pH3.5条件下,每104细胞每小时分解果胶产生1mg半乳糖醛酸为一个酶活力单位。

 

果胶酶活性(mg/h /104cell=(ΔA+0.008) ÷3.9642×V反总÷V×细胞数量÷V样总)÷T

= 2.523×(ΔA+0.008)÷细胞数量

4.细胞培养液

酶活性定义:50℃pH3.5条件下,每毫升培养液每小时分解果胶产生1mg半乳糖醛酸为一个酶活力单位。

果胶酶活性(mg/h /mL=(ΔA+0.008) ÷3.9642×V反总÷V÷T=2.523×(ΔA+0.008)

V反总:反应总体积,0.15mLV样:反应中样本体积,0.03mLV样总:加入提取液体积,1mLCpr:样本蛋白浓度,mg/mLW,样本质量,gT:反应时间,0.5h

 

 

b.       96孔板测定的计算公式如下

标准曲线:y = 1.9821x - 0.008R2 = 0.9996x为标准品浓度,mg/mLy为吸光值。

1.按照蛋白浓度计算

酶活性定义:50℃pH3.5条件下,每毫克蛋白每小时分解果胶产。生1mg半乳糖醛酸为一个酶活力单位。

果胶酶活性(mg/h/mg prot=(ΔA+0.008) ÷1.9821×V反总÷V×Cpr÷T

= 5.045×(ΔA+0.008)÷Cpr

2.按照样本质量计算

酶活性定义:50℃pH3.5条件下,每克样本每小时分解果胶产生1mg半乳糖醛酸为一个酶活力单位。

 

果胶酶活性(mg/h/g 鲜重)=(ΔA+0.008) ÷1.9821×V反总÷V×W÷V样总)÷T

= 5.045×(ΔA+0.008)÷W

3. 按细胞数量计算

酶活性定义:50pH3.5条件下,每104细胞每小时分解果胶产生1mg半乳糖醛酸为一个酶活力单位。

果胶酶活性(mg/h /104cell=(ΔA+0.008) ÷1.9821×V反总÷V×细胞数量÷V样总)÷T

= 5.045×(ΔA+0.008)÷细胞数量

4.细胞培养液

酶活性定义:50℃pH3.5条件下,每毫升培养液每小时分解果胶产生1mg半乳糖醛酸为一个酶活力单位。

果胶酶活性(mg/h/mL=(ΔA+0.008) ÷1.9821×V反总÷V÷T=5.045×(ΔA+0.008)

V反总:反应总体积,0.15mLV样:反应中样本体积,0.03mLV样总:加入提取液体积,1mLCpr:样本蛋白浓度,mg/mL

 

W,样本质量,gT:反应时间,0.5h

 

果胶酶(pectinase)试剂盒注意事项:

1.        试剂二若有沉淀析出,请置于50℃加热溶解。

2.        测定之前请先做预实验,如果吸光值较高或较低,请用提取液做适当的稀释或者加大样本量,并在计算公式中乘以稀释倍数或者以实际加入的样本体积参与计算。

3.        煮沸样本建议在沸水中煮沸10分钟,以将酶彻di灭活。

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