详细介绍
品牌 | YLKBIO | CAS | 详见说明书 |
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分子式 | 详见说明书 | 纯度 | 详见说明书 |
分子量 | 详见说明书 | 货号 | YLK-SH104 |
规格 | 100管/48样、50管/24样 | 供货周期 | 现货 |
主要用途 | 科研 | 应用领域 | 化工,生物产业 |
测定方法: | 微量法、可见分光光度法 |
果胶酶(pectinase)试剂盒说明书
微量法100T/48S
注 意 :正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义:
果胶酶(pectinase)是一类分解果胶质酶类的总称,包括原果胶酶,果胶酯酶,多聚半乳糖醛酸酶和果胶裂解酶四大类,广泛存在于植物果实和微生物中,主要用于食品、酿酒、环保、医药、纺织及日化用品行业。
测定原理:
果胶酶水解果胶生成半乳糖醛酸,具有还原性醛基,与DNS试剂反应生成红棕色物质,在540nm有特征吸收峰,测定540nm处吸光值变化可计算得果胶酶活性。
自备实验用品及仪器:
天平、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、恒温水浴锅。
试剂组成和配制:
提取液:液体100mL×1瓶,4℃保存。
试剂一:液体20mL×1瓶,4℃保存。
试剂二:粉剂×2瓶,4℃保存;临用前加入7.5mL试剂一,50℃加热溶解,用不完的试剂4℃保存一周。
试剂三:液体20mL×1瓶,4℃避光保存。
酶液提取:
1.组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆。10000g 4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
2.细菌、真菌:按照细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1mL提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后10000g,4℃离心10min,取上清置于冰上待测。
3. 细胞培养液等:直接检测。
测定操作表:
对照管 | 测定管 | |
试剂二(µL) | 120 | 120 |
50℃水浴温育5min | ||
样本(µL) | 30 | |
煮沸样本(µL) | 30 | |
混匀,50℃水浴反应30min | ||
试剂三(µL) | 150 | 150 |
沸水浴5min,冰浴冷却终止反应,8000g,4℃,离心10min,蒸馏水调零,取上清于微量石英比色皿或96孔板测定540nm处吸光值A,△A=A测定管-A对照管。每个测定管需设一个对照管。 |
酶活性计算公式:
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
标准曲线:y = 3.9642x - 0.008;R2 = 0.9996;x为标准品浓度,mg/mL;y为吸光值。
1.按照蛋白浓度计算
酶活性定义:在50℃,pH3.5条件下,每毫克蛋白每小时分解果胶产生1mg半乳糖醛酸为一个酶活力单位。
果胶酶活性(mg/h/mg prot)= (ΔA+0.008) ÷3.9642×V反总÷(V样×Cpr)÷T
= 2.523×(ΔA+0.008)÷Cpr
2.按照样本质量计算
酶活性定义:在50℃,pH3.5条件下,每克样本每小时分解果胶产生1mg半乳糖醛酸为一个酶活力单位。
果胶酶活性(mg/h /g 鲜重)=(ΔA+0.008) ÷3.9642×V反总÷(V样×W÷V样总)÷T
= 2.523×(ΔA+0.008)÷W
3. 按细胞数量计算
酶活性定义:在50℃,pH3.5条件下,每104细胞每小时分解果胶产生1mg半乳糖醛酸为一个酶活力单位。
果胶酶活性(mg/h /104cell)=(ΔA+0.008) ÷3.9642×V反总÷(V样×细胞数量÷V样总)÷T
= 2.523×(ΔA+0.008)÷细胞数量
4.细胞培养液
酶活性定义:在50℃,pH3.5条件下,每毫升培养液每小时分解果胶产生1mg半乳糖醛酸为一个酶活力单位。
果胶酶活性(mg/h /mL)=(ΔA+0.008) ÷3.9642×V反总÷V样÷T=2.523×(ΔA+0.008)
V反总:反应总体积,0.15mL;V样:反应中样本体积,0.03mL;V样总:加入提取液体积,1mL;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;W,样本质量,g;T:反应时间,0.5h
b. 用96孔板测定的计算公式如下
标准曲线:y = 1.9821x - 0.008,R2 = 0.9996;x为标准品浓度,mg/mL;y为吸光值。
1.按照蛋白浓度计算
酶活性定义:在50℃,pH3.5条件下,每毫克蛋白每小时分解果胶产。生1mg半乳糖醛酸为一个酶活力单位。
果胶酶活性(mg/h/mg prot)=(ΔA+0.008) ÷1.9821×V反总÷(V样×Cpr)÷T
= 5.045×(ΔA+0.008)÷Cpr
2.按照样本质量计算
酶活性定义:在50℃,pH3.5条件下,每克样本每小时分解果胶产生1mg半乳糖醛酸为一个酶活力单位。
果胶酶活性(mg/h/g 鲜重)=(ΔA+0.008) ÷1.9821×V反总÷(V样×W÷V样总)÷T
= 5.045×(ΔA+0.008)÷W
3. 按细胞数量计算
酶活性定义:在50℃,pH3.5条件下,每104细胞每小时分解果胶产生1mg半乳糖醛酸为一个酶活力单位。
果胶酶活性(mg/h /104cell)=(ΔA+0.008) ÷1.9821×V反总÷(V样×细胞数量÷V样总)÷T
= 5.045×(ΔA+0.008)÷细胞数量
4.细胞培养液
酶活性定义:在50℃,pH3.5条件下,每毫升培养液每小时分解果胶产生1mg半乳糖醛酸为一个酶活力单位。
果胶酶活性(mg/h/mL)=(ΔA+0.008) ÷1.9821×V反总÷V样÷T=5.045×(ΔA+0.008)
V反总:反应总体积,0.15mL;V样:反应中样本体积,0.03mL;V样总:加入提取液体积,1mL;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;
W,样本质量,g;T:反应时间,0.5h
果胶酶(pectinase)试剂盒注意事项:
1. 试剂二若有沉淀析出,请置于50℃加热溶解。
2. 测定之前请先做预实验,如果吸光值较高或较低,请用提取液做适当的稀释或者加大样本量,并在计算公式中乘以稀释倍数或者以实际加入的样本体积参与计算。
3. 煮沸样本建议在沸水中煮沸10分钟,以将酶彻di灭活。
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