详细介绍
品牌 | YLKBIO | CAS | 详见说明书 |
---|---|---|---|
分子式 | 详见说明书 | 纯度 | 详见说明书 |
分子量 | 详见说明书 | 货号 | YLK-SH103 |
规格 | 100管/48样、50管/24样 | 供货周期 | 现货 |
主要用途 | 科研 | 应用领域 | 化工,生物产业 |
测试方法: | 微量法、紫外分光光度法 |
果胶裂解酶(pectinate lyases,PL)试剂盒说明书
微量法100T/48S
注 意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
测定意义:
果胶裂解酶(EC4.2.2.10)是果胶酶的重要组成部分,是一种能降解植物细胞壁,导致植物组织软化甚至死亡的解聚酶,来源比较广泛,主要来源于微生物,可用于果汁、果酒的澄清,提高水果出汁率,植物病毒的纯化,纸浆的漂白和纺织品的生物精炼,在减少环境污染和降低能源消耗方面具有潜在的应用价值。
测定原理:
果胶裂解酶作用于果胶中的α-1,4糖苷键,生成在还原端C4和C5之间位置具有不饱和键的不饱和寡聚半乳糖醛酸,在235nm处有特征吸收峰。
自备实验用品及仪器:
天平、低温离心机、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板(UV板)、恒温水浴锅。
试剂组成和配制:
提取液:液体100mL×1瓶,4℃保存。
试剂一:液体6mL×1瓶,4℃保存。
试剂二:液体6mL×1瓶,4℃保存。
试剂三:液体6mL×1瓶,4℃保存。
酶液提取:
1.组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL提取液),进行冰浴匀浆。10000g ,4℃离心10min,取上清,置冰上待测。
2.细菌、真菌:按照细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1mL提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后10000g,4℃,离心10min,取上清置于冰上待测。
3. 培养液:直接测定。
测定操作表:
1、 分光光度计/酶标仪预热30min,调节波长至235nm,蒸馏水调零。
2、 操作表
对照管 | 测定管 | |
试剂一(μL) | 120 | |
试剂二(μL) | 120 | |
40℃温育3min | ||
酶液(μL) | 20 | 20 |
混匀,40℃反应30min | ||
试剂三(μL) | 60 | 60 |
混匀于微量石英比色皿/96孔板(UV板)测定235nm处吸光值A,△A=A测定管-A对照管。 |
酶活性计算公式:
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下
1. 组织中PL活性
(1)按照蛋白浓度计算
酶活性定义:在40℃,pH5.5条件下,每毫克蛋白每分钟分解果胶产生1nmol不饱和半乳糖醛酸所需的酶量为一个酶活力单位。
PL活性(nmol/min/mg prot)= △A÷(ε×d)×V反总÷(V样×Cpr)÷T
= 64.1×△A÷Cpr
(2)按照样本质量计算
酶活性定义:在40℃,pH5.5条件下,每克组织每分钟分解果胶产生1nmol不饱和半乳糖醛酸所需的酶量为一个酶活力单位。
PL活性(nmol/min/g 鲜重)= △A÷(ε×d)×V反总÷(V样×W÷V样总)÷T
= 64.1×△A÷W
2. 细菌、真菌PL活性
酶活性定义:在40℃,pH5.5条件下,每104个细胞每分钟分解果胶产生1nmol不饱和半乳糖醛酸所需的酶量为一个酶活力单位。
PL活性(nmol/min/104cell)= △A ÷(ε×d)×V反总÷(V样×细胞数量÷V样总)÷T
= 64.1×△A÷细胞数量
3. 培养液PL活性
酶活性定义:在40℃,pH5.5条件下,每毫升培养液每分钟分解果胶产生1nmol不饱和半乳糖醛酸所需的酶量为一个酶活力单位。
PL活性(nmol/min/mL)= △A÷(ε×d)×V反总÷V样÷T
= 64.1×△A
ε:不饱和半乳糖醛酸摩尔消光系数:5200L/mol/cm;d:比色皿光径,1cm;V反总:反应总体积,0.2mL;V样:反应体系中样本体积,0.02mL;V样总:加入提取液体积,1mL;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;W,样本质量,g;T:反应时间,30min
b. 用96孔板测定的计算公式如下
1. 组织中PL活性
(1)按照蛋白浓度计算
酶活性定义:在40℃,pH5.5条件下,每毫克蛋白每分钟分解果胶产生1nmol不饱和半乳糖醛酸所需的酶量为一个酶活力单位。
PL活性(nmol/min/mg prot)= △A÷(ε×d)×V反总÷(V样×Cpr)÷T
= 128.2×△A÷Cpr
(2)按照样本质量计算
酶活性定义:在40℃,pH5.5条件下,每克组织每分钟分解果胶产生1nmol不饱和半乳糖醛酸所需的酶量为一个酶活力单位。
PL活性(nmol/min/g 鲜重)= △A÷(ε×d)×V反总÷(V样×W÷V样总)÷T
= 128.2×△A÷W
2. 细菌、真菌PL活性
酶活性定义:在40℃,pH5.5条件下,每104个细胞每分钟分解果胶产生1nmol不饱和半乳糖醛酸所需的
酶量为一个酶活力单位。
PL活性(nmol/min/104cell)=△A÷(ε×d)×V反总÷(V样×细胞数量÷V样总)÷T
= 128.2×△A÷细胞数量
3. 培养液PL活性
酶活性定义:在40℃,pH5.5条件下,每毫升培养液每分钟分解果胶产生1nmol不饱和半乳糖醛酸所需的酶量为一个酶活力单位。
PL活性(nmol/min//mL)= △A÷(ε×d)×V反总÷V样÷T
= 128.2×△A
ε:不饱和半乳糖醛酸摩尔消光系数:5200L/mol/cm;d:比色皿光径,0.5cm;V反总:反应总体积,0.2mL;V样:反应体系中样本体积,0.02mL;V样总:加入提取液体积,1mL;Cpr:样本蛋白浓度,mg/mL;W,样本质量,g;T:反应时间,30min
果胶裂解酶(pectinate lyases,PL)试剂盒仅供科研!
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